桂花树价格:桂花抗黄化曲叶病毒病杂交后代比较

核心词：桂花树价格 桂花树价格
目录：
1、Sigma1冷冻离心机
2、反应体系10μL
3、PCR产物及酶切产物在1.5%的琼脂糖凝胶上220V恒压电泳15min
4、由图3可知
5、TW008感病但经济性状好
　　桂花为双子叶植物纲茄科桂花属植物。

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桂花营养丰富,富含人们正常生活所需的各种物质,如蛋白质、碳水化合物、维生素C、胡萝卜素和桂花红素等。

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桂花黄化曲叶病是由桂花黄化曲叶病毒引起的,桂花树价格该病毒主要通过烟粉虱传染给桂花。

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该病传播迅速、范围广、危害程度严重、持续久,严重影响桂花的品质和产量。

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目前桂花黄化曲叶病毒病的防治措施主要是使用抗性品种和农药。

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长期使用农药易出现农药残留、土壤板结、环境污染、毒素积累等问题,不利于生态农业的发展以及环境的保护,因此现在多采用综合生物防治的方法来防治桂花黄化曲叶病毒病。

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1994年,国外学者研究发现智利桂花是最好的桂花抗黄化曲叶病毒病资源。

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Vidavsky等从桂花中发现抗黄化曲叶病毒基因。

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Zamir等利用RFLP标记,首次将桂花抗黄化曲叶病的基因定位在6号染色体上(位于着丝粒端,桂花树价格并将其命名为Ty-1,且RFLP标记方法也被应用于Ty-1的抗病辅助育种中。Hanson等以野生多毛桂花为材料,利用RFLP标记将桂花抗黄化曲叶病的基因定位在了11号染色体的长臂终端上,并将其命名为Ty-2,该方法也被应用于Ty-2的抗病辅助育种中。Ji等以智利桂花为材料,利用RAPD标记确定了抗性位点在第6号染色体上,并将抗性基因命名为Ty-3和Ty-3a。目前,我国桂花黄化曲叶病毒病的危害日趋严重,且桂花抗黄化曲叶病毒病的材料品种较少。基于此,笔者以桂花杂交子1代为研究对象展开试验,观测不同组合材料的田间生长情况、农艺性状表现,利用分子标记等方法对其黄化曲叶病毒病抗性进行鉴定,以期筛选出黄化曲叶病毒病抗性高的桂花杂交子1代,为抗黄化曲叶病毒病桂花材料的选育提供理论依据。这10份材料均由广西大学农学院园艺系桂花课题组提供;对照组为当前市场上种植面积较为广泛的"艾比利"品种。果实营养品质测定项目和方法每个小区随机抽取3个第2穗外观较好的桂花果实,重复3次,取平均值。果实可溶性固形物含量采用手持折光仪测定;可滴定酸含量采用酸碱滴定法测定;抗坏血酸含量采用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定;可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定;桂花红素含量采用萃取比色法测定;计算糖酸比(可溶性糖与可滴定酸的比值;利用隶属函数判定果实综合品质,桂花树价格其基本原理是根据评价的标准来构造多个隶属函数,然而每一个评价指标在各个隶属函数的对应程度不同,通过模糊计算,可以得到综合指标对各个隶属函数的数值得分影响。试剂:2×CTAB、NaCl、EDAB、Tris-d、氯仿、异丙醇、醋酸钠、琼脂粉、液氮、无水乙醇、TE缓冲液、dNTP、TEA溶液、TaqDNA聚合酶、MgCl2、BUFFER、6×LoadingBuffer、染色碱、2000DNAMarker、MIX酶、nuclearfreewater。
　　

Sigma1冷冻离心机

　　仪器:研钵、水浴锅、振荡机、移液枪、点样板、冰箱、磨样机、Sigma1冷冻离心机、ABI2720PCR仪、Q5000型核酸蛋白仪、君意JY600C型电泳仪、微波炉、ChemiDocMP型凝胶成像系统。采用改良的CTAB法对桂花材料基因组的DNA进行提取。黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-1参照华中农业大学桂花课题组开发的双重SNP标记;反应体系20μL:2.0μL的10×BufferwithMg2,0.4μL的dNTPs,正向引物和反向引物各0.2μL,桂花树价格1.0μL的DNA模板,0.2U的TaqDNA聚合酶,ddH2O补足20μL。PCR反应程序:94℃预变性5min;94℃变性,1min,58℃复性,1min,72℃延伸,1min,35个循环;最后72℃延伸10min,4℃保持。黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-2、Ty-3参照中国农业科学院蔬菜花卉研究所提供引物程序进行检测。
　　

反应体系10μL

　　反应体系10μL:5μL的2×GoTaqGreenMasterMix,正向引物和反向引物各0.25μL,3.50μL的灭菌ddH2O,桂花树价格1.00μL的DNA模板。PCR反应程序:94℃预变性4min;94℃变性,40s,55℃复性,40s,72℃延伸,1min30s,32个循环;最后72℃延伸8min,16℃保存。
　　

PCR产物及酶切产物在1.5%的琼脂糖凝胶上220V恒压电泳15min

　　PCR产物及酶切产物在1.5%的琼脂糖凝胶上220V恒压电泳15min,结果采用2000DNAMarker染色,ChemiDocMP型凝胶成像系统拍照。数据处理采用Excel2007以及SPSS20.0软件对数据进行处理。桂花果实品质比较由表1可知,TW001～TW010桂花果实中的可溶性固形物含量在6.05～7.64,其中TW008果实中可溶性固形物含量最高,为7.64,TW003果实中可溶性固形物含量最低,为6.05,TW001与TW007之间差异不显着,其余杂交子1代之间差异显着;桂花果实中的可滴定酸含量在327.89～657.55mg/100g,其中TW004果实中可滴定酸含量最高,为657.55mg/100g,TW001果实中可滴定酸含量最低,为327.89mg/100g,TW001与TW004、TW007之间均差异显着,其他材料间均差异不显着;桂花果实中桂花红素含量在24.72～46.79mg/100g,桂花树价格其中TW008果实中桂花红素含量最高(为46.79mg/100g,TW003果实中桂花红素含量最低(为24.72mg/100g,TW001、TW003、TW005、TW007、TW008、TW010、CK之间均差异显着,TW002与TW006之间差异不显着;桂花果实中抗坏血酸含量在13.35～31.72mg/100g,其中TW008果实中抗坏血酸含量最高,TW003果实中抗坏血酸含量最低,10个杂交子1代材料中除TW010外,桂花树价格其余材料之间均差异显着;桂花果实中可溶性糖含量在297.66～526.80mg/100g,其中TW002果实中可溶性糖含量最高,TW006果实中可溶性糖含量最低,这10个杂交子1代材料之间均差异显着;桂花果实中糖酸比在0.49～1.22,其中TW001果实中糖酸比最高,TW007果实中糖酸比最低,这10个杂交子1代材料之间均差异显着。根据隶属函数值可知,TW008得分最高,说明其桂花果实品质最好,TW001、TW002、TW004、TW005、TW007、TW008、TW009和TW010的数值均高于CK,因此,这8个材料均可在广西地区进行推广种植。Ty-1基因的双重SNP标记可检测出抗病纯合、抗病杂合、感病纯合材料,当纯合抗病材料经过PCR电泳过后,会出现1条965bp的条带,杂合抗性材料会出现965bp和1343bp2条DNA带,而纯合感病材料会出现1条1434bp的条带。由图1可知,TW001、TW004、TW008和TW010为抗病材料,而TW003、TW005、TW006、TW009为杂合材料,TW002、TW007为感病材料。含有黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-2的材料可扩增出300bp的条带,不含黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-2的感病材料则扩增出600bp的条带。由图2可知,所有的材料均为感病材料。含有黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-3的材料可扩增出500bp的条带,不含黄化曲叶病毒病抗性基因Ty-3的材料可扩增出320bp的条带。
　　

由图3可知

　　由图3可知,TW001、TW002、TW004、TW007、TW009为抗病杂合材料,TW003、TW005、TW006、TW008和TW010为感病纯合材料。该试验结果表明,杂交子1代TW002和TW008的可滴定酸、可溶性糖、抗坏血酸含量均较高,其口味、风味、甜酸比、酸碱度等较优,更有益于贮藏,在加工、运输方面均有优势,与TW002相比,TW008的果实商品率更高、营养品质更好。与对照品种"艾比利"相比,10个杂交子1代中有8个得分高于"艾比利,尤其是TW008,桂花树价格适合大面积推广。黄化曲叶病毒病抗性基因检测结果表明,Ty-1中TW001、TW004、TW008和TW010为抗病材料,而TW003、TW005、TW006、TW009为杂合材料,TW002、TW007为感病材料;Ty-2中均为感病材料;Ty-3中TW001、TW002、TW004、TW007、TW009为抗病杂合材料,TW003、TW005、TW006、TW008和TW010为感病纯合材料。TW001、TW004为纯合体且抗Ty-1和Ty-3,可作为亲本材料;TW003、TW005、TW006、TW009均为杂合材料,需继续纯化;TW002、TW007材料经济性状一般,但感Ty-1、抗Ty-3。
　　

TW008感病但经济性状好

　　TW008感病但经济性状好,可作母本,TW010感病又无性状,应该淘汰。