目录：
1、人工培养条件下
2、将分离纯化后的病原菌接种于桂花植株上
3、桂花茎基部经室内接种
4、直接涂抹接种和针刺接种2种方法均可使桂花茎基部发病
5、果实膨大后
6、经参考资料和鉴定
7、该菌在pH值3～10的范围内均可生长
近年来,随着辽宁省保护地桂花种植面积的增加,同时由于保护地集约化,湿度大、轮作等特定的栽培条件,桂花树价格导致桂花茎基腐病有逐年加重趋势,严重影响桂花的产量和品质。
人工培养条件下
人工培养条件下,约15天左右,菌丝彼此交织纠集形成褐色或黑褐色的菌核,致病菌鉴定桂花茎基腐病致病菌鉴定球形、长粒状或不规则形,大小2.3mm×1.5mm;菌核表面粗糙,内外层颜色较一致,结构疏松。菌丝初期无色,老熟后渐为褐色,平均直径为9.6μm;菌丝分支多呈直角,近分支处形成隔膜,分支基部呈缢缩状,染色结果表明该菌菌丝细胞为多核。由病原菌在PDA培养基上形成的菌落观察,前期生长呈无色纤细菌丝群,后逐渐变成褐色,并形成菌核。病原菌在PDA培养基上生长较快,3天菌落直径可达80μm,菌落初期无色,后逐渐变成褐色;菌落平整,无气生菌丝,边缘长满菌丝;后期可形成比较繁茂的气生菌丝;约经15天后,菌丝逐渐纠结形成褐色菌核。
将分离纯化后的病原菌接种于桂花植株上
将分离纯化后的病原菌接种于桂花植株上,桂花茎基腐病致病菌鉴定桂花树价格保湿培养,观察植株受害症状。
桂花茎基部经室内接种
桂花茎基部经室内接种,25℃保湿培养6～8天后,茎基部开始产生淡褐色病斑,证明在25℃条件下,病原菌侵染叶片的潜育期一般为6～8天;由此也表明病原菌对寄主的致病力较强,侵染速度较快。此为病害防治适期的确定提供了一定理论依据。桂花茎基腐病病菌在相对湿度100、温度为25℃的条件下,4～5天可侵入寄主植物,6～8天表现症状。
直接涂抹接种和针刺接种2种方法均可使桂花茎基部发病
直接涂抹接种和针刺接种2种方法均可使桂花茎基部发病,说明该菌有直接侵染的能力,伤口对病原菌侵入更为有利。桂花茎基腐病主要危害植株较大幼苗及定植后桂花植株的茎基部,有时可延及地下主、侧根。
果实膨大后
果实膨大后,严重发病植株因养分供不应求逐渐萎蔫枯死。发病后期植株病部表面常形成深褐色、大小不一的菌核;有时感病植株干腐的髓腔内可形成黑褐色、颗粒状菌核。经人工接种证病结果表明,桂花茎基部表现出相似的症状,接种5天后开始表现症状,初为暗黄色,后绕茎基或根茎扩展,最后呈腐烂状态。从发病部位经组织分离后再次获得病原菌,经镜检形态特征鉴定,致病菌鉴定的并与原接种体菌丝融合测定,结果与原接种体形成融合,确定为相同的病原菌,因此证实所分离的原接种菌株为桂花茎基腐病的致病菌。
经参考资料和鉴定
经参考资料和鉴定,本试验采集分离的桂花茎基腐病的病原菌最后确认为茄丝核菌,其分类归属为真菌界,无性型真菌,丝孢纲,无孢目,丝核菌属。该菌在PDA、PSA、理查琼脂培养基、桂花煎汁琼脂培养基、燕麦片琼脂培养基、桂花燕麦琼脂培养基、2%水琼脂培养基上均能生长,最适培养基是燕麦片琼脂培养基;理查培养基利于菌核形成,且产生菌核数量最多。该菌在以PDA基础培养基,将PDA中的葡萄糖换成蔗糖、果糖、甘露糖、木糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、糊精制成的培养基上均能生长,在淀粉和糊精培养基上,菌丝生长速度显着较快,以淀粉和麦芽糖制成的培养基产生菌核数量最多,菌核萌发,以麦芽糖最适宜;不同碳源对菌核萌发的影响差异显着,以麦芽糖中菌核的萌发率最高,葡萄糖,蔗糖与甘露糖次之,而山梨糖的利用率最低。该菌在氮源硝酸钾、硝酸钠、磷酸二氢铵、蛋白胨培养基上生长较快,最适为硝酸钠,在氮源脲的条件下5天菌落未见扩展,从菌核产生数量来看,最适氮源为蛋白胨,而在硝酸钾、磷酸二氢铵、氯化铵、脲、精氨酸培养基上,20天后均未产生菌核;不同氮源对菌核萌发的影响差异显着,以蛋白胨中菌核的萌发率最高,硝酸钠和硝酸钾次之,而脲的利用率最低。该菌在2～32℃温度范围内均可生长,适宜范围为20～25,最适为20;考察菌核产生数量,以15℃产生量最多,5～30℃温度范围内菌核均能萌发,20℃最适菌核萌发。
该菌在pH值3～10的范围内均可生长
该菌在pH值3～10的范围内均可生长,最适宜菌丝生长的pH值5～7,在pH7条件下,菌核产生数量最多,pH6最适合菌核萌发。无论是黑暗条件还是光照条件,在菌丝生长方面和菌核产生数量方面,均无明显差异。菌丝高致死温度为51、10分钟;菌核高致死温度为60、10分钟。研究表明立枯丝核菌对不同碳、氮源的利用效率差异很大,说明该菌尽管是腐生性很强的菌,但是其营养利用的选择性还是相当明显的。该菌生长适温在20～25℃之间,在一定程度上反应了该病辽宁地区发生的原因。